科普中國(guó)-生物等效性實(shí)驗(yàn)

生物等效性試驗(yàn)是指用生物利用度研究的方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為指標(biāo)，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成分吸收程度和速度有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的人體試驗(yàn)，試驗(yàn)對(duì)象為健康男性，一般要求18～24例。

一、簡(jiǎn)介

生物等效性是指生物效應(yīng)的一致性，主要包括臨床應(yīng)用的安全性與有效性。仿制藥的研究開發(fā)與臨床藥品應(yīng)用的替換，其基本要求都是不同制劑間具有生物等效性。因此，生物等效性試驗(yàn)在藥品研發(fā)中具有非常重要的地位和作用。藥物制劑間的生物等效性評(píng)價(jià)，雖然可以通過臨床對(duì)照試驗(yàn)，用臨床指標(biāo)判斷兩種或兩種以上制劑是否具有生物等效性，但臨床效應(yīng)測(cè)定結(jié)果的影響因素眾多、結(jié)果變異大、樣本量要求大，因此并不是首選的評(píng)價(jià)方法。

二、實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

1.設(shè)定的背景

目前，國(guó)內(nèi)外最常用的BE評(píng)價(jià)方法是藥動(dòng)學(xué)方法，即采用生物利用度（Bioavailability，BA）指標(biāo)進(jìn)行BE評(píng)價(jià)。通常，BA指制劑中活性成分被吸收的程度和速度。用藥動(dòng)學(xué)方法進(jìn)行BE評(píng)價(jià)，就是考察藥學(xué)等效制劑或可替換藥品在相同試驗(yàn)條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收的程度和速度是否滿足預(yù)先設(shè)定的等效標(biāo)準(zhǔn)。在藥動(dòng)學(xué)參數(shù)中，表征吸收程度和速度的參數(shù)主要是AUC、Tmax和Cmax。因此，用藥動(dòng)學(xué)方法評(píng)價(jià)制劑間是否具有生物等效性，就是以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)價(jià)試驗(yàn)制劑與參比制劑測(cè)得的AUC、Tmax和Cmax等指標(biāo)是否滿足預(yù)先設(shè)定的等效標(biāo)準(zhǔn)。預(yù)先設(shè)定的等效標(biāo)準(zhǔn)如何，也就成為影響B(tài)E評(píng)價(jià)的關(guān)鍵因素之一。

根據(jù)臨床醫(yī)生的建議以及FDA以往的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)大多藥品來說，如果循環(huán)系統(tǒng)的藥物暴露差別在20%以內(nèi)，將不會(huì)對(duì)臨床治療效果產(chǎn)生顯著影響。基于此點(diǎn)，F(xiàn)DA設(shè)定了試驗(yàn)制劑和參比制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（AUC和Cmax）“差異應(yīng)小于20%”作為等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，具體判定方法為：通過雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(1-2α%)置信區(qū)間法，得到兩種制劑AUC或Cmax幾何均值比值的90%置信區(qū)間(ConfidenceInterval，CI)，對(duì)于非窄治療窗的藥物，此90%CI必須落在80.00%～125.00%范圍內(nèi)。另外，F(xiàn)DA和EMEA的指導(dǎo)原則還特別強(qiáng)調(diào)，此置信區(qū)間必須保留兩位有效數(shù)字，并且不得通過四舍五入的方法，使受試藥物BE檢驗(yàn)合格，即下限的最低值為80.00%，而上限不得超過125.00%，比如某項(xiàng)生物等效性試驗(yàn)結(jié)果為79.96%～110.20%，則判定為生物不等效。作為非正態(tài)分布的Tmax，則要求用非參數(shù)的統(tǒng)計(jì)方法證明制劑間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.全球主要國(guó)家、組織和機(jī)構(gòu)采用的生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)

同F(xiàn)DA要求一致，其他主要國(guó)家、地區(qū)的藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)（包括歐盟EMEA，日本厚生?。┖褪澜缧l(wèi)生組織（WHO）都以80.00%～125.00%作為AUC和Cmax90%CI的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)。在上述機(jī)構(gòu)所制訂的指導(dǎo)原則中，對(duì)于AUC的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)比較嚴(yán)格，通常只能縮小范圍（如：針對(duì)某些治療窗窄的藥物，EMEA建議可以縮小范圍至90.00%～111.11%）。相對(duì)而言，Cmax的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)具有一定的靈活性，比如加拿大藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)（HealthCanada）只要求Cmax均值的比值落在80～125%即可。EMEA和WHO則提出，對(duì)于某些特殊情況的藥物（如高變異藥物，即藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的個(gè)體內(nèi)差異在30%以上），可以根據(jù)情況適當(dāng)擴(kuò)大等效性判定標(biāo)準(zhǔn)的范圍，如EMEA建議對(duì)于個(gè)體內(nèi)變異(CVintra)為35%的藥物，等效性判定標(biāo)準(zhǔn)可以擴(kuò)大到77.23%～129.48%，當(dāng)CVintra為40%時(shí)，該范圍可擴(kuò)大至74.62%～134.02%，當(dāng)CVintra為50%或以上則可以擴(kuò)大至69.84%～143.19%。但申辦方必須提供證據(jù)證明，在此判定標(biāo)準(zhǔn)下，不會(huì)引起藥物安全性問題，并保證藥物的臨床療效沒有顯著差異，即需要證明Cmax差異的增大不會(huì)引起不良反應(yīng)的顯著增加，也不會(huì)顯著影響療效。此外Cmax等效性判定標(biāo)準(zhǔn)范圍的擴(kuò)大必須在BE試驗(yàn)開始前設(shè)定，并提供相應(yīng)的證據(jù)，而不能在試驗(yàn)結(jié)束后，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果更改。

日本厚生省則建議，如果擴(kuò)大Cmax的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)范圍，必須滿足以下三個(gè)條件：

（1）受試者人數(shù)不低于20，或在增加受試者人數(shù)之后總?cè)藬?shù)不低于30；

（2）Cmax均值的對(duì)數(shù)差值在log(0.9)～log(1.1)之間；

（3）對(duì)于體外溶出試驗(yàn)，在任何的試驗(yàn)條件下，當(dāng)參比制劑體外溶出為30%，50%和80%時(shí)，受試制劑和參比制劑溶出度差別都在10%以內(nèi)。

3.我國(guó)目前的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)

我國(guó)2005年頒布的《化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中，AUC的90%CI的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)一致，而Cmax的標(biāo)準(zhǔn)，由于當(dāng)時(shí)技術(shù)水平相對(duì)較低、臨床試驗(yàn)條件等的限制，為方便BE試驗(yàn)的管理和審評(píng)，統(tǒng)一設(shè)定了較為寬松的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，即70%～143%1。

近年來，隨著我國(guó)臨床藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)水平的進(jìn)步和制劑研究水平的提升，對(duì)于藥品質(zhì)量控制的要求將更加嚴(yán)格，以確保高質(zhì)量仿制藥的開發(fā)。因此，參考先進(jìn)國(guó)家與組織的規(guī)定，有必要提高Cmax的等效性判定標(biāo)準(zhǔn)要求，即采用80.00%-125.00%作為等效性判定標(biāo)準(zhǔn)。在此標(biāo)準(zhǔn)下，特殊藥物，如高變異藥物，可以適當(dāng)擴(kuò)大等效性判定標(biāo)準(zhǔn)范圍，但申辦者必須在BE試驗(yàn)前提供相關(guān)安全性和臨床療效的證據(jù)，以及個(gè)體內(nèi)變異情況的證據(jù)，在此基礎(chǔ)上重新設(shè)定等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，如：75.00%-133.00%或者70.00%-143.00%。在試驗(yàn)結(jié)束后，即使發(fā)現(xiàn)由于個(gè)體內(nèi)差異很大，造成生物不等效，也不能根據(jù)結(jié)果再次對(duì)等效性判定標(biāo)準(zhǔn)的范圍進(jìn)行放大。應(yīng)當(dāng)通過擴(kuò)大受試者人數(shù)重新進(jìn)行臨床試驗(yàn)，降低標(biāo)準(zhǔn)偏差，來重新判定生物等效性。

三、實(shí)驗(yàn)方法

FDA推薦的生物等效性試驗(yàn)方法包括體內(nèi)和體外的方法。按方法的優(yōu)先考慮程度從高到低排列如下2：

1.藥代動(dòng)力學(xué)法：測(cè)量生物樣本如全血，血漿，血清，或其他生物樣本中藥物的活性成份，或其代謝產(chǎn)物的濃度與時(shí)間的關(guān)系；體外法：此種方法具有已確立好的體內(nèi)外相關(guān)關(guān)系，可用于預(yù)測(cè)人體生物利用度的相關(guān)數(shù)據(jù)．

2.人體體內(nèi)法：測(cè)量尿樣樣本中藥物的活性成份，或其代謝產(chǎn)物的濃度與時(shí)間的關(guān)系。

3.藥效法：測(cè)量藥物的活性成份，或其代謝產(chǎn)物的即時(shí)藥效與時(shí)間的關(guān)系。

4.臨床試驗(yàn)法：通過設(shè)計(jì)良好的臨床比較試驗(yàn)以綜合的療效終點(diǎn)指標(biāo)來確立生物等效性。

5.體外方法通常為體外溶出度測(cè)定法：能夠確保體內(nèi)生物利用度。

6.FDA認(rèn)可的任何其它用于測(cè)量生物利用度和生物等效性的方法。

四、實(shí)驗(yàn)規(guī)程

1.試驗(yàn)前題

應(yīng)用以下材料:

1.1藥政部門同意進(jìn)行生物等效性試驗(yàn)的批文，同一批號(hào)的藥檢部門的檢驗(yàn)報(bào)告書。

1.2同類制劑的臨床文獻(xiàn)，應(yīng)有療效分析，不良反應(yīng)及藥代動(dòng)力學(xué)的內(nèi)容。

1.3受試藥的臨床前藥理和毒理試驗(yàn)的報(bào)告及生物等效性試驗(yàn)的計(jì)劃。

1.4受試藥制劑及少量純品(供作標(biāo)準(zhǔn)曲線用)，參比藥制劑。

2.受試者

為了減少個(gè)體誤差并保障受試者的安全，應(yīng)注意以下幾點(diǎn):

2.1選男性青年：年齡相差不超過10歲。身長(zhǎng)以160一180cm為宜。體重應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重土10%范圍內(nèi)。我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)體重可按下式估算:

BMI=體重(kg)/身高2(m2)。

一般規(guī)定BMI≤24(kg/m2),同一批受試者體重不宜太懸殊，因受試者服用的藥物劑量是相同的。4

特殊藥物可選用婦女、兒童、腫瘤病人，不受上述限制。

2.2受試前檢查：心電圖、血壓、肝腎功能、血常規(guī)等應(yīng)正常，記錄既往病史和既往用藥史。注意過敏體質(zhì)及有藥物過敏史者切勿入選。受試2wk前未用其他藥物。

2.3列表報(bào)告：體重、身長(zhǎng)、心率、血壓、ALT、BUN、Cr及用藥順序(TOR或ROT)。

2.4知情同意書：有每人病史、體檢、化驗(yàn)結(jié)果及簽名，倫理委員會(huì)總批件。

2.5例數(shù)：國(guó)內(nèi)規(guī)定12一24例，F(xiàn)DA18一24例。例數(shù)少難合格，誤差大者例數(shù)應(yīng)多一

些。

2.6管理：用藥前禁食12h，用藥后禁食4h，統(tǒng)一上午7時(shí)(或8時(shí))用藥，以溫開水200ml送服。實(shí)驗(yàn)期間統(tǒng)一飲食，用膳時(shí)間應(yīng)一致，以免影響藥峰時(shí)間。不吃茶、酒、高脂食物，不作劇烈運(yùn)動(dòng)或整日臥床，否則誤差增大。

2.7取血點(diǎn)：FDA規(guī)定16-20個(gè)點(diǎn)，我國(guó)9-16個(gè)點(diǎn)。至少3個(gè)半衰期或最低藥濃小于峰值藥濃的1/10，建議根據(jù)文獻(xiàn)或先以較密間距實(shí)測(cè)1-2人，以上升段、峰值段各3-4點(diǎn)，下降段4-6點(diǎn)為宜。最后一點(diǎn)至少已有3個(gè)半衰期或藥濃小于峰值藥濃的1/10-1/20。

2.8清洗期通常取1wk，說明間隔幾個(gè)半衰期，是否已達(dá)到清洗目的。

3.藥物

3.1供試藥及參比藥均應(yīng)報(bào)告藥名、制劑、規(guī)格、廠商、批號(hào).

3.2參比藥應(yīng)說明選用理由宜用已上市的同樣產(chǎn)品?；瘜W(xué)上是同一物質(zhì)，處方、生產(chǎn)工藝、制劑及劑量基本一致。特殊情況下可用不同規(guī)格、劑量或劑型，應(yīng)充分說明理由。

3.3檢測(cè)應(yīng)報(bào)告儀器、試劑、內(nèi)標(biāo)物的規(guī)格、來源、詳細(xì)檢測(cè)條件(色譜柱、流動(dòng)相、流速、波長(zhǎng)、靈敏度、溫度)及血藥濃度檢測(cè)方法。報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)曲線(R>0，98)、回歸方程、線性范圍。

最低檢出濃度。列出標(biāo)準(zhǔn)品、血漿及含藥血漿的圖譜以說明專屬性及干擾情況。理論塔板數(shù)不得小于1000?；厥章首?個(gè)濃度各5次重復(fù)，絕對(duì)回收率>70%，RSD<10%-15%。精密試驗(yàn)作3個(gè)濃度各5次重復(fù)的日間、日內(nèi)差異，RSD(15%-20%)。

4.藥代動(dòng)力學(xué)

4.1說明軟件名稱：用AIC判定房室模型。各例最佳房室數(shù)不同時(shí)，可取多數(shù)受試者的最佳房室數(shù)進(jìn)行分析。也可用非參數(shù)法:簡(jiǎn)予計(jì)算。

4.2各時(shí)間的藥濃數(shù)值：平均值的曲線常易出現(xiàn)畸變，故只有參考意義，不必用平均值擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。計(jì)算AUC時(shí)，藥濃低于檢出限時(shí)，不應(yīng)作為零，也不宜棄去該點(diǎn)。該點(diǎn)的數(shù)值可由終末端半衰期推算。該值小于檢出限時(shí)，則作為估計(jì)值;該值大于檢出限時(shí)，則以檢出限作為估計(jì)值，應(yīng)以括號(hào)標(biāo)志，表示僅供參考。

4.3用表列出每人各時(shí)間的實(shí)測(cè)血藥濃度，以半對(duì)數(shù)圖繪出每人的C-T曲線。

4.4列出每人實(shí)測(cè)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

5.等效性檢驗(yàn)

5.1方法國(guó)際上規(guī)定以雙向單側(cè)T檢驗(yàn)為標(biāo)準(zhǔn)方法。其他方法雖可使用，但等效性判斷上如結(jié)論不同，仍應(yīng)以雙向單側(cè)T檢驗(yàn)為準(zhǔn)。

5.2等效標(biāo)準(zhǔn)我國(guó)規(guī)定等效標(biāo)準(zhǔn)是80%-120%，F(xiàn)DA規(guī)定AUC及Cmax用對(duì)數(shù)值，此時(shí)等效標(biāo)準(zhǔn)是80%-125%(也即乘除0.8)。用表列出實(shí)測(cè)AUC、Cmax、Tmax的雙向單側(cè)T檢驗(yàn)的兩側(cè)t值及T0.05值。最好列出方差分析表(藥劑間、個(gè)體間、周期間)。

5.3檢驗(yàn)參數(shù)：AUC反映吸收數(shù)量、Tmax反映吸收速度、Cmax與安全性有關(guān)。生物等效性并非只算AUC。Tmax可因取點(diǎn)不當(dāng)而達(dá)不到要求。建議在峰值附近多取幾點(diǎn)（如1、1.5、2、2.5、3、4h）。FDA有的專家認(rèn)為等效性檢驗(yàn)以AUC、Cmax為主，Tmax只供參考。

6.等效性判斷及報(bào)告

6.1方差分析F檢驗(yàn)及各參數(shù)的組間。檢驗(yàn)是差異性檢驗(yàn)，不是等效性聳驗(yàn)。因此，這些檢驗(yàn)的P>0.05不能認(rèn)大等效；P<0.05也不能認(rèn)為差異有顯著意義，等效性不合格。

6.2所有病人的F或T/R值都在80%-120%范圍內(nèi)并不能肯定等效卷合格。反之，個(gè)別人的F值>120%，或<80%，只要雙向單側(cè)t檢驗(yàn)均為P<0.05，仍應(yīng)判為等效性合格。

6.3方差分析的周期間變異是第1次用藥與第2次用藥間的變異。如有顯著意義并不一定是清洗期不夠。清洗期超過7個(gè)半衰期時(shí)殘留藥濃小于0.8%，清洗期已是足夠的。

6.4方差分析的個(gè)體間變異顯著，提示個(gè)體差異大，用藥時(shí)應(yīng)注意調(diào)節(jié)劑量。由于等效性檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)誤與方差分析的殘差有關(guān)，已經(jīng)扣除了個(gè)體間、藥物間、周期間的變異。因此，上述3項(xiàng)變異無(wú)論有無(wú)顯著意義，都不影響等效性判斷。

6.5方差分析中，一般不計(jì)算組間變異(即ROT組與TOR組之間的變異)，因?yàn)?，它已包括在個(gè)體變異之中。在總變異中再減去組間變異是錯(cuò)誤釣，殘羞將減小基至成為負(fù)值。

7.等效性檢驗(yàn)

正規(guī)計(jì)算是：先用方差分折算出殘余誤差，再用雙向單側(cè)t檢驗(yàn)計(jì)算兩個(gè)方向的t值才能作出等效判斷，通常要角計(jì)算機(jī)進(jìn)行計(jì)算3。

8.總結(jié)

說明主要參數(shù)及耐受情況，對(duì)等效性做出合格或不合格的明確判斷。

9.研究單位及人員簽章

研究單位、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)人、負(fù)責(zé)人、參加人員、資料保管人及保管單位、保管地點(diǎn)、研究日期、研究單位蓋章。(必須附有藥代動(dòng)力學(xué)文獻(xiàn)，以便核對(duì)審查)