凝血素
凝血素是一種植物凝集素,其特點能與糖結(jié)合,是具有生物活性的糖蛋白,能凝固紅血球,因為植物凝集素與動物細(xì)胞上的特異糖基有很高的親和力,不同動物細(xì)胞表面有不同類型的糖基,所以不同來源植物凝集素與不同種動物的細(xì)胞膜有特異性結(jié)合反應(yīng)。據(jù)Smith.K.J報導(dǎo),這種凝集素受單個顯性基因控制。大豆凝血素與兔紅細(xì)胞有特異性凝血反應(yīng),并使細(xì)胞凝集從懸浮液中析出,可根據(jù)凝血反應(yīng)強(qiáng)度,用凝血效價表示含量。
在籽實中凝血素常分布于絨毛的葉細(xì)胞和胚組織中,許多豆科植物的種子中都含有性質(zhì)各不相同的凝血素,且不同的凝血素可對動物細(xì)胞產(chǎn)生各種各樣的作用,其主要原因是凝血素的來源和糖專一性以及供血動物的不同,現(xiàn)在已從Dilochosbiflorus,Amphicarpaea bracteata,pnaseolus lu-natus、vicia cracca和vicia villosa等植物的種子中純化出凝血素,它們能凝集A型紅細(xì)胞,并能與血型物質(zhì)A產(chǎn)生特異的沉淀。大豆凝血素是一種糖原蛋白質(zhì),脫脂后的大豆粕粉約含有3%的凝血素,分子量為120,000,由4個相同的亞基組成,每個亞基分子量為30,000,每個分子有4條鏈,每個亞基載有一條缺糖鏈Mang(GIC-NAC)。大豆凝血素使動物血液中的紅血球凝集,據(jù)報道,在白鼠腹內(nèi)膜上注射凝血素,能把白鼠殺死,Tollefssn,C.F.and Kornfeld R(1983)報導(dǎo)從大豆中提取的凝血素能夠使人的紅細(xì)胞發(fā)生強(qiáng)烈凝集作用并且能夠產(chǎn)生沉淀。
血凝機(jī)理目前普遍認(rèn)為凝血素血凝作用的機(jī)理為:凝血素分子的一個亞基與一個血紅細(xì)胞表面的凝血素專一識別的糖基結(jié)合,另一個亞基與另一個細(xì)胞的糖基結(jié)合,從而通過凝血素的架橋作用導(dǎo)致血球凝聚,具有血型專一性的凝血素與該凝血素的糖結(jié)合部位識別血紅細(xì)胞表面血型抗原決定簇并與之結(jié)合的結(jié)果。生長旺盛的細(xì)胞易被凝集。除凝血外,大豆中的凝血素還對腸壁、刷狀酶緣活性、小腸粘膜細(xì)胞代謝、腸道細(xì)菌生態(tài)物質(zhì)代謝及免疫機(jī)能產(chǎn)生一定的影響。因此,在利用大豆作為飼料或制取大豆制品時,最好除去大豆中的凝血素。據(jù)報道,大豆凝血素在0.1M D-半乳糖或者在0.1M 2-乙酰胺- 2脫氧- D半乳糖存在下,用檸檬酐使氨基酸基團(tuán)變性可降低其活性,用環(huán)己烷- 1,2-dione處理能夠使其精氨酸基團(tuán)變性1,在自然或變性的狀態(tài)下,用N-溴代丁二酸使色氨酸基團(tuán)變性也能導(dǎo)致其活性完全喪失。但是采用上述方法后,添加的物質(zhì)及反應(yīng)的生成物都會對大豆制品造成不良的影響。由于大豆凝血素在干熱的狀態(tài)下是抗失活的,而在濕熱的狀態(tài)下能夠大大的減少其活性。干熱處理和一定時間內(nèi)的發(fā)芽不能使凝血素活性
凝血效價凝血素與動物細(xì)胞上的特異糖基有很高的親和力,不同動物細(xì)胞表面有不同類型的糖基,所以不同來源植物凝集素與不同種動物的細(xì)胞膜有特異性結(jié)合反應(yīng)。據(jù)Smith.K.J報導(dǎo),這種凝集素受單個顯性基因控制。大豆凝血素與兔紅細(xì)胞有特異性凝血反應(yīng),并使細(xì)胞凝集從懸浮液中析出,可根據(jù)凝血反應(yīng)強(qiáng)度,用凝血效價表示含量2。觀察凝血反應(yīng)在固定的實驗臺上,平面搖動多孔白磁比色板,若紅血球發(fā)生凝集,則呈現(xiàn)膜狀物與生理鹽水明顯分離現(xiàn)象與空白試驗不同,可確定有凝血反應(yīng),若血液中兔紅細(xì)胞均勻分散在生理鹽水中與空白試驗相同,則沒有凝血反應(yīng)。凝血反應(yīng)程度用凝血效價表示。凝血效價表示方法紅血球呈現(xiàn)凝集現(xiàn)象的最高稀釋度為該樣品的凝集效價。凝集效價越高,說明該樣品中凝血素含量越高。