[科普中國(guó)]-峰面積

內(nèi)標(biāo)法

內(nèi)標(biāo)法是一種間接或相對(duì)的校準(zhǔn)方法。在分析測(cè)定樣品中某組分含量時(shí)，加入一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)以校準(zhǔn)和消除出于操作條件的波動(dòng)而對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。 內(nèi)標(biāo)法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術(shù)。使用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，在樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它可被色譜拄所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積與相對(duì)響應(yīng)值，即可求出待測(cè)組分在樣品中的百分含量。采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說(shuō)，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的己知化合物，這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去，它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，最好是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當(dāng)然，在色譜分析條什下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數(shù)情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復(fù)雜過(guò)程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過(guò)程中很容易被完全回收的化合物作內(nèi)標(biāo)，來(lái)測(cè)定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說(shuō)的選擇原則。

外標(biāo)法外標(biāo)法external standard method 色譜分析中的一種定量方法，它不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中，而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定，把得到的色譜峰面積與被測(cè)組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測(cè)組分的含量。外標(biāo)物與被測(cè)組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時(shí)外標(biāo)物的濃度應(yīng)與被測(cè)物濃度相接近，以利于定量分析的準(zhǔn)確性1。

峰高和峰面積的選擇在色譜定量分析中，選用峰高法還是選用峰面積法，主要決定在檢測(cè)器的線性范圍內(nèi)，峰高和峰面積測(cè)量的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。除了歸一化法最好用峰面積法外，其他三種定量方法中峰高和峰面積都可用作精確的定量方法。
在檢測(cè)器的線性范圍內(nèi)，峰高和峰面積測(cè)量的準(zhǔn)確性受色譜分離度的影響，要準(zhǔn)確地測(cè)量峰高和峰面積，色譜分離應(yīng)達(dá)到一定的分離度才行。圖2-3-18 至圖2-3-22給出了峰高比1:1至16:1 時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)分離度曲線，每張圖上的黑點(diǎn)表示了每個(gè)峰峰尖的真實(shí)位置，此黑點(diǎn)與圖中所示的峰尖的垂直位移就是測(cè)量誤差。峰高比越大，要求能準(zhǔn)確測(cè)量峰高的分離度也越大。峰高比為1/1和2/1時(shí)，峰高能得到準(zhǔn)確測(cè)量的最低分離度為0.8；峰高比為4/1 時(shí)，峰高能得到準(zhǔn)確測(cè)量的最低分離度為1.0；峰高比16/1 時(shí)，峰高能得到準(zhǔn)確測(cè)量的最低分離度為1.25。關(guān)于分離度對(duì)峰高測(cè)定準(zhǔn)確度的影響大致可認(rèn)為：當(dāng)分離度Rs-1.0 時(shí)，相對(duì)峰高從128:1 變化到1:128時(shí)，峰高的測(cè)量誤差小于+-3%。

在分離度較好，色譜峰形較好，峰面積可以準(zhǔn)確測(cè)量時(shí)，以用峰面積法定量為好。特別是在氣相色譜使用程序升溫和液相色譜使用多元梯度洗脫時(shí)，最好使用峰面積法定量。但當(dāng)分離度不好，色譜峰形不好（如嚴(yán)重拖尾）時(shí)，峰面積測(cè)量引起的誤差較大，此時(shí)使用峰高法定量較好。保留時(shí)間短的色譜峰峰形較尖（峰尾寬較?。藭r(shí)峰高測(cè)定較峰面積測(cè)定準(zhǔn)確，宜用峰高法定量；而保留時(shí)間長(zhǎng)的色譜峰峰形較寬（峰尾寬較大），此時(shí)峰面積測(cè)定較峰高測(cè)定準(zhǔn)確，宜用峰面積法定量2。