[科普中國]-尿內(nèi)源氮

定義

內(nèi)源尿氮（endogenous urinay nitrogen）動(dòng)物基礎(chǔ)代謝(或飼喂無氮日糧)時(shí)由尿液排出的氮，是體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝處于最低限度時(shí)的尿氮，主要是尿素、尿酸和由肌酸分解而來的肌酐等中的氮。這部分氮和其所含能量不屬于未被利用的飼料養(yǎng)分，在測(cè)定飼料的真代謝能和蛋白質(zhì)利用率時(shí)應(yīng)扣除。為機(jī)體不攝入蛋白質(zhì)時(shí)尿中所含的氮，它主要來自組織蛋白的分解。

定量表示第一，以絕食代謝為基礎(chǔ)表示的內(nèi)源尿氮排泄量。對(duì)鼠、豬等反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明，平均每日每千焦耳絕食代謝的能量，排泄內(nèi)源尿氮約0.5mg，或每日每千克代謝體重（W0.75）排泄內(nèi)源尿氮150mg。

第二，用回歸模型表示。研究發(fā)現(xiàn)，EUN排泄量與動(dòng)物維持能量需要具有類似規(guī)律，特別是生長(zhǎng)動(dòng)物，僅用簡(jiǎn)單的定量表示方法難于普遍適用。用回歸表示可更接近EUN的實(shí)際排泄量，例如肉牛的EUN排泄量，用下式估計(jì):
EUN(g/日)=5.9206·logW0.76 W——體重（kg）

蛋白質(zhì)的生物學(xué)價(jià)值（biological value，BV）是以氮的攝入與排出的比較為基礎(chǔ)，反映蛋白質(zhì)經(jīng)體內(nèi)消化吸收后，被機(jī)體利用的程度，蛋白質(zhì)生物價(jià)的值越大，則該蛋白質(zhì)利用率越高。

氮儲(chǔ)留量=氮吸收量-（尿氮-尿內(nèi)源氮）；氮吸收量=攝入氮-（糞氮-糞代謝氮）；即：

蛋白質(zhì)生物價(jià)=氮儲(chǔ)留量/氮吸收量*100%1

測(cè)定1 試劑與儀器

1.1 試劑 10%CuSO4;濃H2SO4;2%EDTA;1%NaOH:堿性碘化汞鉀;硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液

(0.1mg/ml)

1.2 儀器 UV- 754型分光光度計(jì)

2 原理

樣品經(jīng)濃H2SO4消化后，尿中的氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨存在于消化液中。在堿性條件下，NH+4能與堿性碘化汞鉀生成黃色化合物，顏色深淺與尿氮含量成正比，可與標(biāo)準(zhǔn)比較定量

3 操作方法

3.1 樣品處理

準(zhǔn)確吸取5ml尿樣于100ml凱氏燒瓶中，加入2ml 10%CuSO4，10ml濃H2SO4，加熱消化至淡藍(lán)色透明，再加熱1h，冷卻，以無氨水定容至1000ml。

3.2 樣品測(cè)定

吸取消化液1ml于25ml比色管中，加少量水，加入1ml 1%NaOH，1ml 2%EDTA，5ml堿性碘化汞鉀，用無氨水定容至25ml，混勻，以空白調(diào)零，于波長(zhǎng)430nm處比色。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

準(zhǔn)確吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液于25ml比色管中，加少量水和1%CuSO4溶液1ml，加入1ml 1%NaOH溶液，以下操作同樣品測(cè)定。

4 結(jié)果分析

4.1 最大吸收峰

取0.5ml硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述操作于波長(zhǎng)400～ 700nm掃描，得最大吸收峰為430nm

4.2 加入NaOH對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

吸取0.5ml硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液8份，分成2組，每組4份。第一組按下述操作，各加少量水，加1:1硫酸0.5ml，加堿性碘化汞鉀5ml，測(cè)吸光值。第二組各加少量水，加1ml1%NaOH，加堿性碘化汞鉀5ml，測(cè)吸光值。

4.3 EDTA用量

吸取樣品處理液1ml，按上述操作加入0～ 2.0ml 2%EDTA溶液。結(jié)果加入1ml EDTA溶液獲得最大吸收峰。

4.4 線性范圍

取硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述操作。結(jié)果在13～ 81ug范圍內(nèi)線性相關(guān)(r= 0.9986)。

4.5 回收率

取8份樣品，按上述操作得回收率為95.63%- 98.25%。

4.6 對(duì)比

用本法和凱氏定氮法對(duì)某一尿樣同時(shí)進(jìn)行平行測(cè)定，結(jié)果本法變異系數(shù)為4.77%，而凱氏定氮法為5.06%。經(jīng)t檢驗(yàn)，t值為0.49