[科普中國]-除草劑殘留量檢測方法

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了糧谷及油籽中酰胺除草劑殘留量檢驗(yàn)的抽樣、制樣和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、大豆中酰胺除草劑殘留量的定量測定，其它食品可參照執(zhí)行。

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GB 2763 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

原理試樣中除草劑用丙酮和水提取，把提取液中丙酮減壓去除后，加入氯化鈉溶液，用正己烷反萃取，濃縮正己烷提取液，然后用乙腈提取，弗羅里硅土固相萃取柱凈化，樣液供氣相色譜-質(zhì)譜測試，外標(biāo)法定量。

試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682中規(guī)定的一級水。

試劑正己烷（C6H14）：色譜純。

乙腈（CH3CN）：色譜純。

丙酮(CH3COCH3)：色譜純。

乙醚((C2H5)2O)：色譜純。

無水硫酸鈉（Na2SO4）：經(jīng) 650?C 灼燒 4 h，冷卻后置于干燥器中備用。

氯化鈉(NaCl)：分析純。

溶液配制氯化鈉溶液：10 %（m/V）,將 100 g 氯化鈉溶于水中，并稀釋至 1000 mL。

提取劑 I：乙腈加入少量正己烷飽和，搖勻。

提取劑Ⅱ：正己烷加入少量乙腈飽和，搖勻。

正己烷-乙醚（85+15）：取 85 mL 正己烷和 15 mL 乙醚，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品毒草胺、莠去津、乙草胺、二甲吩草胺、甲草胺、嗪草酮、異丙甲草胺、敵稗、丁草胺、丙草胺、敵草胺標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于 98%。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制分別準(zhǔn)確稱取 25 ± 0.1 mg 標(biāo)準(zhǔn)品于 50 mL 容量瓶中，用丙酮溶解并定容，得到濃度為 500 ?g/mL單標(biāo)儲備液，此溶液在 0～4 ℃中可保存 3 個月。根據(jù)需要再用丙酮稀釋儲備液，配制成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，此溶液在 0～4 ℃中可保存 1 個月。

材料弗羅里硅土固相萃取柱：125 mg，3 mL，或相當(dāng)者。使用前依次用 5 mL 正己烷-乙醚溶液和 5 mL正己烷預(yù)淋洗柱子，流速 1 d/sec。

儀器和設(shè)備氣相色譜-質(zhì)譜儀。

分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

固相萃取裝置。

吹氮濃縮儀。

旋渦混合器。

均質(zhì)機(jī)。

離心機(jī)。

茄形瓶：100 mL，250 mL。

離心管：15 mL，50 mL。

微量注射器：10 μL。

試樣制備與保存試樣制備將樣品按四分法縮分至 1 kg，樣品取樣部位按GB 2763附錄A執(zhí)行，全部磨碎并通過 40 目篩，混勻，均分成兩份，裝入潔凈的容器內(nèi)，密封，標(biāo)明標(biāo)記。

試樣保存將試樣于-5 ℃以下避光保存。在抽樣和制樣過程中,必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。

分析步驟提取稱取約 10 g（精確至 0.01 g）樣品于 50 mL 離心管中，加入 10 mL 水和 20 mL 丙酮，均質(zhì) 3 min，于 4000 r/min 離心 4 min，將提取液移入 250 mL 茄形瓶中，離心管中殘渣再用 30 mL ? 2 丙酮提取，提取液并入茄形瓶中。在 38 ℃下，減壓蒸發(fā)去除丙酮，殘液（約 10 mL）轉(zhuǎn)移至另一 50 mL 離心管中。依次用 10 mL 10 %氯化鈉溶液和 15 mL 正己烷洗滌茄形瓶，洗滌液一并移入離心管中，振蕩 3 min，于2500 r/min 離心 3 min，收集正己烷相。離心管中的水相中再用 15 mL ? 2 正己烷提取，合并正己烷相。

液-液分配凈化正己烷相中加入適量無水硫酸鈉脫水，將正己烷相完全轉(zhuǎn)移至另一 250 mL 茄形瓶中，于 50oC，減壓蒸發(fā)至干。殘余物用 5 mL ? 2 提取液Ⅱ溶解，一并轉(zhuǎn)移至 50 mL 離心管中。加入 10 mL ? 3 提取液I，混勻、分層，乙腈相轉(zhuǎn)移至另一 50 mL 離心管中。加入 10 mL 提取液Ⅱ，混勻、分層后棄去正己烷相，乙腈相轉(zhuǎn)移至 100 mL 茄形瓶中，在 50 oC 下，減壓蒸發(fā)至干，殘余物用 5 mL 正己烷溶解。

固相萃取凈化將上述正己烷溶液移入弗羅里硅土固相萃取柱中，液體過柱流速保持 0.5 d/sec，用 15 mL 正己烷-乙醚溶液潤洗茄形瓶并轉(zhuǎn)移至柱中進(jìn)行洗脫，流速為 1 d/sec，收集全部洗脫液于定量試管中，于 40 oC，在氮?dú)饬飨麓抵两?，加入正己烷溶解殘渣并定容?1.0 mL，供 GC-MS 測定。

測定氣相色譜參考條件a）色譜柱：HP-1701 MS, 30 m ? 0.25 mm (內(nèi)徑) ? 0.25 ?m（膜厚），或相當(dāng)者；

b）載氣：氦氣(純度大于 99.999%)，流量:1.0 mL/min。

c）色譜柱程序升溫條件：初始溫度：70 ℃（保持 1 min）；15 ℃/min，升溫至 160 ℃（保持 1 min）；2 ℃/min 的速度，升溫至 200 ℃（保持 2 min）；20 ℃/min，升溫至 280 ℃（保持 8 min）。

d）進(jìn)樣口溫度：270 ℃。

e）進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1 min 后打開分流閥，分流比 100：1。

f）進(jìn)樣量：1 μL；

質(zhì)譜參考條件a）離子源溫度：230 °C

b）傳輸線溫度：280 ℃

c）離子化模式：EI

d）掃描范圍：50 - 400 amuGB 23200.1—20163

e）電子倍增管電壓：自動調(diào)諧電壓 200 V；

f）測試方式：選擇離子監(jiān)測。

色譜測定與確證定量測定根據(jù)樣液中除草劑含量情況，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中除草劑的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。以單點(diǎn)或多點(diǎn)外標(biāo)法定量，標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液應(yīng)等體積參插進(jìn)樣測定。

定性測定定性測定的兩個依據(jù)為：（1）被測樣品峰與標(biāo)準(zhǔn)樣品峰的色譜保留時間相同；（2）被測樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)譜圖相似，被測樣品的監(jiān)測離子的相對豐度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，二者之差不大于? 10 %（EI模式）。各除草劑的監(jiān)測離子及定量離子參見附錄 A。在上述色譜、質(zhì)譜條件下，毒草胺、莠去津、乙草胺、二甲吩草胺、甲草胺、嗪草酮、異丙甲草胺、敵稗、丁草胺、丙草胺、敵草胺的保留時間分別為 11.2 min、13.2 min、13.8 min、14.9 min、15.3 min、15.7 min、15.9 min、16.9 min、19.3 min、20.6 min、21.9 min。選擇離子色譜圖參見附錄 B，質(zhì)譜圖參見附錄 C 中 C1 至 C4。7.5 空白實(shí)驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測定步驟進(jìn)行。

結(jié)果計算和表述用色譜工作站或按下式（1）計算試樣中除草劑的含量，計算結(jié)果須扣除空白值。x= A*C*V/(AS*M)（1） AS * m式中:

X —試樣中除草劑含量，mg/kg；

A －試樣中除草劑峰面積；

AS－標(biāo)準(zhǔn)溶液中除草劑峰面積；

c －標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,mg/L；

V －樣品溶液最終定容體積，mL；

m －樣品稱重，g。

注：計算結(jié)果須扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。

精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄D的要求。

在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄 E 的要求。

定量限和回收率定量限毒草胺、莠去津、乙草胺、異丙甲草胺、丙草胺、敵草胺、二甲吩草胺、嗪草酮、敵稗的定量限為0.02 mg/kg; 甲草胺、丁草胺的定量限為 0.05 mg/kg。

回收率大米中除草劑添加濃度及其回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

毒草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 90.3 % - 94.5 %;

莠去津添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 89.8 % - 95.5 %;

乙草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 84.5 % - 93.5 %;GB 23200.1—20164

二甲吩草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 84.5 % - 93.8 %;

甲草胺添加濃度為 0.05 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 83.7%- 93.9 %;

嗪草酮添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 88.3 %– 95.6 %;

異丙甲草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 88.1 % - 93.8 %;

敵稗添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 83.7 % - 95.8 %;

丁草胺添加濃度為 0.05 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 76.8 % - 89.5 %;

丙草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 86.9 % - 97.5 %;

敵草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 94.2 % - 101.9 %。

大豆中除草劑添加濃度及其回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

毒草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 78.1 % - 92.0 %;

莠去津添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 80.8 % - 92.8 %;

乙草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 80.8 % - 88.6 %;

二甲吩草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 78.7 % - 90.9 %;

甲草胺添加濃度為 0.05 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 76.1 % - 86.4 %;

嗪草酮添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 81.7 %–91.5 %;

異丙甲草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 81.6 %–90.3 %;

敵稗添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 82.9 % - 92.5 %;

丁草胺添加濃度為 0.05 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 72.8 % - 83.6 %;

丙草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 86.4 % - 92.7 %;

敵草胺添加濃度為 0.02 mg/kg - 2.0 mg/kg 范圍內(nèi)，回收率為 88.4 % - 96.0 %。