[科普中國(guó)]-內(nèi)分生孢子

某些細(xì)菌生長(zhǎng)的一定階段,在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形、橢圓形或柱形的休眠體.由于它位于細(xì)胞內(nèi),為區(qū)別放線菌、霉菌等形成的分生孢子,故又稱內(nèi)生孢子

簡(jiǎn)介常指由真菌產(chǎn)生的一種形小、量大、外生的無(wú)性繁殖體。多為單細(xì)胞、色較深、不運(yùn)動(dòng)、抗干燥。一般由分生孢子梗等特殊菌絲通過(guò)斷裂形成，成熟后分生。形態(tài)、構(gòu)造、大小、顏色和排列等特征因種而異，是菌種鑒定的重要依據(jù)。實(shí)踐上可用于分離、篩選、育種、保藏和接種擴(kuò)大等。放線菌也有類似的分生孢子。一種無(wú)性孢子，可以為一到多個(gè)細(xì)胞的，和有許多不同的形狀（子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌產(chǎn)生的無(wú)性孢子,大多由芽殖、裂殖方式產(chǎn)生）。

鑒定方式內(nèi)生真菌的分離培養(yǎng)與保存菌株Sal54是從采自江蘇省鹽城市大豐港海灘的野生鹽生海蘆筍中分離得到。在無(wú)菌操作下, 取一根植株, 依次經(jīng)過(guò)75%乙醇、1%次氯酸鈉、75%乙醇各浸泡1min, 然后用無(wú)菌水漂洗3次, 無(wú)菌吸水紙吸干其表面水分。用滅菌后的剪刀將其剪成7~9mm小段, 放在PDA平板上, 每板3~5根, 于28℃恒溫培養(yǎng)至植物組織內(nèi)部長(zhǎng)出菌絲。將真菌轉(zhuǎn)移到新的平板培養(yǎng)基上劃線分離得到單個(gè)菌落, 然后轉(zhuǎn)移到PDA斜面試管中, 4℃保存。

真菌分離純化與發(fā)酵培養(yǎng)基PDA分離培養(yǎng)基 (g/L) :土豆200、葡萄糖20、瓊脂20、食鹽30, 自來(lái)水配制。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基 (g/L) :土豆200、麥芽糖20、甘露醇20、葡萄糖10、味精5、蛋白胨5、酵母膏3, p H6.0。

試劑與儀器Taq酶及PCR相關(guān)試劑 (包括d NTP與PCR Buffer等) 上海天根生化科技 (北京) 有限公司;OMEGA真菌基因組試劑盒 (Fungal DNA Kit 50) 及引物 (ITS1/ITS4/NS1/NS8) 上海捷瑞生物工程有限公司;其他分析純?cè)噭┠暇鄣略噭┢鞑挠邢薰尽?/p>

ECLIPSE TE2000-S熒光倒置顯微鏡日本Nikon株式會(huì)社;Microfuge 22R臺(tái)式微量冷凍離心機(jī)美國(guó)Beckman公司;TP600型梯度PCR儀日本Ta Ka Ra公司;DYCP-31DN電泳儀北京市六一儀器廠;JS-380C全自動(dòng)數(shù)碼凝膠成像分析儀上海培清科技有限公司。

菌株的耐鹽度實(shí)驗(yàn)在真菌發(fā)酵用液體培養(yǎng)基中分別添加30、60、90、120、150、180g/L的Na Cl, 接種后于28℃、150r/min培養(yǎng)7d, 觀察生長(zhǎng)情況, 每組實(shí)驗(yàn)平行3次。

菌株的形態(tài)學(xué)觀察從保藏菌種的斜面培養(yǎng)基中挑取菌絲轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基中間位置, 28℃培養(yǎng)4~5d, 觀察菌落大小、顏色、質(zhì)地等形態(tài)特征。挑取菌落邊緣菌絲, 制作水浸片, 在光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲體、孢子、孢子梗等。

基因組DNA的提取從保藏菌種的斜面培養(yǎng)基中挑取菌絲轉(zhuǎn)接到PDA平板上, 28℃培養(yǎng)4~5d?；蚪MDNA的提取采用真菌基因組試劑盒 (Fungal DNA Kit 50) , 嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。提取的基因組DNA在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測(cè) (120V, 30min) , 溴化乙錠 (EB) 染色。4℃保存?zhèn)溆? 或于-20℃中長(zhǎng)期保存。1

本詞條內(nèi)容貢獻(xiàn)者為:

張磊 - 副教授 - 重慶師范大學(xué)